1.2 Достоинства и недостатки метода ПЦР

Процесс ПЦР заключается в большом числе циклов синтеза (амплификации) специфического фрагмента ДНК, накоплении большого числа копий, которые затем могут быть выявлены обычными методами детекции [9].

ПЦР используется во многих областях для проведения анализов и в научных экспериментах.

Преимущества метода ПЦР:

для анализа методом ПЦР пригоден абсолютно любой биологический материал;

специфичность ПЦР равна 100% (при правильном выполнении ПЦР ложноположительный результат невозможен);

высокая чувствительность (ПЦР позволяет выявить от нескольких копий до одного возбудителя в образце);

одновременно можно выявить несколько возбудителей в одном образце;

динамика численности возбудителя заболевания (ПЦР позволяет определять количество копий возбудителя в образце, что позволяет оценить эффективность проводимой терапии);

процесс полностью автоматизирован и результат ПЦР можно получить через несколько часов после начала исследования [8].

Недостатки метода ПЦР:

Несмотря на вышеуказанные достоинства метод ПЦР все же не лишен некоторых недостатков, которые следует учитывать при оценке результатов исследований:

1.Амплифицируется ДНК как живого, так и погибшего микроорганизма. Это налагает определенные требования при использовании ПЦР для контроля эффективности лечения. В общем случае подобный контроль должен проводиться спустя промежуток времени, втечение которого происходит полная элиминация возбудителя. Однако, метод NASBA выявляет РНК только живых микроорганизмов и позволяет избежать этих ограничений.

2.Высокая чувствительность. Ряд микроорганизмов (условно - патогенная флора, УПФ) в норме может существовать у человека в малом количестве. При помощи метода ПЦР определяются даже самые малые количества УПФ, даже при отсутствии патологии. Однако эта проблема решена с появлением метода количественного определения ДНК.

3.Различия при использовании разных тест систем. Как говорилось выше, для амплификации можно использовать различные участки генома возбудителя. Однако в случае различных мутации микроорганизмов возможно изменение или утрата генов. Это приводит к разным результатам при использовании тест систем разных производителей.

Контаминация - попадание из внешней среды в реакционную смесь специфических молекул ДНК, способных служить мишенями в реакции амплификации и давать ложноположительные результаты [4].