1.2 Методы диагностики вирусных гепатитов

Основными из методов лабораторной диагностики вирусных гепатитов являются молекулярно-генетические методы, где выполняется дифференциальная диагностика и прямое выявление нуклеиновых кислот в исследуемом материале с помощью реакции молекулярной гибридизации и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Диагностическая суть этих методов заключается в том, что у исследователей имеются определенные олигонуклеотиды, воспроизводящие (или комплементарные), высококонсервативные и высокоспецифичные последовательности нуклеотидов из искомого генома. В реакции молекулярной гибридизации такие олигонуклеотиды называют зондами, в методе ПЦР -праймерами. В реакции молекулярной гибридизации назначение этих специфических олигонуклеотидов - найти в исследуемой нуклеиновой кислоте комплементарные последовательности, и сформировать структуры согласно природе комплементарных взаимодействий между парами азотистых оснований [Бобкова, 1999].

Метод ПЦР был разработан в 1985 году применительно к гену бета-глобина для диагностики серповидно-клеточной анемии. ПЦР имитирует естественный процесс репликации (размножения) ДНК, в результате чего, в течение нескольких часов из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 50 млрд. идентичных молекул. Таким образом, можно изучить генетический материал, присутствующий в крошечных количествах [Носик, Стаханова, 2000].

В лабораторной диагностике инфекций широко применяется метод иммуноферментного анализа, основанный на обнаружении характерных для возбудителя антигенов и (или) выявлении у пациента антител к ним. Механизмом, лежащим в основе иммуноферментного анализа (ИФА), является реакция взаимодействия антигена со специфичным для него антителом, в результате которой получается комплекс антиген-антитело. Данная реакция проводится с использованием антител (или антигенов), специально выпущенных, меченных специальным ферментом. В результате, все образовавшиеся комплексы антиген-антитело имеют в своем составе эту метку, которая при добавлении специального реагента дает изменение окраски исследуемого образца. По интенсивности окрашивания можно судить о наличии в исследуемом материале антигенов или антител, характерных для данной инфекции.

Иммуноферментный анализ имеет ряд преимуществ, которые определяют его частое применение в настоящее время:

· широкий спектр инфекций, которые могут быть диагностированы с помощью данного метода. Это, в частности, инфекции передаваемые половым путем (хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз, сифилис), вирусные инфекции (в т.ч. вирусные гепатиты, герпес, ВИЧ), клещевой энцефалит, боррелиоз и многое другое;

· быстрота проведения исследований, направленных на определение антигена возбудителя, либо на однократное определение уровня антител (обычно 1-3 дня);

· применимость для возбудителей, культивирование и микроскопия которых представляет сложности;

· возможность оценки иммунного ответа на возбудителя;

· по соотношению иммуноглобулинов различных классов врач может сделать вывод о стадии заболевания, что является важным показателем для диагностики инфекций [Современные иммунологические…, 2009].