2.4.2 Общая схема проведения иммуноферментного анализа

1. Вынуть из пакета рамку и подготовить необходимое количество стрипов.

2. Внести контрольные образцы в объеме 100 мкл. Количество лунок с контрольными образцами зависит от количества используемых стрипов.

3. В остальные лунки внести исследуемые образцы. В зависимости от исследуемого маркера сыворотки либо разводят 1:10 или 1:5 либо не разводят.

4. Инкубировать стрипы при температуре 37єС. Время инкубации определяется тест - системой: от 30 минут до 2 часов.

5. По истечении указанного времени содержимое лунок удалить в емкость для сбора инфицированного материала и планшет промывают 4 - 5 раз промывочным раствором.

6. Во все лунки внести по 100 мкл раствора конъюгата и выдержать планшет в термостате 30 минут при температуре 37єС.

7. По окончании инкубации планшет промыть и во все лунки внести по 100 мкл субстратной смеси.

8. Выдержать планшет 30 минут в защищенном от света месте при комнатной температуре.

9. Реакцию остановить добавлением в лунки по 50 мкл стоп - реагента. Провести учет результатов.

Учет результатов проводится спектрофотометрически при двух длинах волн - 450 нм и при референс - длине волны в диапазоне от 620 до 680 нм. Реакция учитывается, если среднее значение оптический плотности в лунках с положительным и отрицательным контрольными образцами соответствуют значениям, заданным производителем данной тест - системы. Этот показатель является специфичным для каждой тест - системы. Положительными считаются образцы со значениями, превышающими или равными критическому значению оптической плотности (ОП крит.). ОП крит. рассчитывается по формуле:

ОП крит. = ср.знач. ОП (К - ) +x,

где значение х определяется типом тест - системы.

Определение HBeAg и анти - HBc Ig M свидетельствует об активной репликации вируса гепатита В и соответственно о стадии разгара заболевания. Анти - HBc IgG и анти - HBe IgG указывают на завершение острого периода. Выявление анти-HBs-IgG (IgM) и анти-HВe-IgG позволяет говорить о перенесенной ранее HBV инфекции [Диагностика гепатита В, 2007].

Наличие в исследуемых образцах того или иного маркера HCV или их сочетаний имеет важное диагностическое значение:

IgM (+) и Ig G (+) - обострение HCV - инфекции

IgM (-) и Ig G (+) - латентная фаза гепатита С

IgM (+) и Ig G (-) - острая фаза HCV - инфекции.