Тема7 токсикология фосфорорганических соединений

Работа 1. Ферментный метод определения фосфорорганических пестицидов в патологическом материале

Материальное оснащение: баня водяная, термометр химический до 100 °С, пробирки, колбы мерные на 100 и 50 мл, пипетки по 0,2-10 мл отдельно для каждого реактива, склянки с притертыми проб­ками, химические стаканы, весы, вата.

Принцип метода. В основу метода положена способность фос­форорганических соединений (ФОС) угнетать холинэстеразу. Основ­ное значение этого фермента разложение избытка ацетилхолина на холин и уксусную кислоту. Последняя в ходе реакции изменяет окраску индикатора бромтимолового синего до зеленого цвета. При угнетении фермента замедляется расщепление ацетилхолина, и образование ук­сусной кислоты в реакционной смеси происходит в течение дли­тельного времени, что устанавливают по скорости изменения окраски индикатора.

О наличии пестицидов в пробе судят по степени угнетения ак­тивности холинэстеразы, выраженной в процентах. Расчет проводят по калибровочному графику. Чувствительность метода 0,1 мг/кг анализи­руемого продукта. Точность метода 80%. Метод рекомендуется для определения хлорофоса, метафоса, карбофоса, трихлорметафоса-3, ме-тилнитрофоса, метилмеркаптофоса, ДДФВ и диброма в органах и тканях животных.

Подготовка материала к исследованию. Исследуемый материал тщательно измельчают, после чего навеску в 20-30 г помещают в стаканчик с притертой пробкой, заливают адекватным количеством хлороформа (20-30 мл), закрывают пробкой и экстрагируют в течение часа при периодическом встряхивании. Затем пипеткой, нижний конец которой обернут ватой, набирают 1 мл хлороформенного экстракта и переносят в пробирку (или химический стаканчик). В другую конт­рольную пробирку (или химический стаканчик) вносят 1 мл хлоро­форма. Обе пробирки помещают на водяную баню при температуре не выше 40 °С или под струю воздуха до полного испарения хлорофор­ма. К сухому остатку обе пробирки добавляют по 1 мл дистиллиро­ванной воды и снова помещают пробирки на водяную баню на 3 мин. После этого охлаждают до комнатной температуры.

Ход опыта. В опытную (№ 1) и контрольную (№ 2) пробирки вносят по 1 мл раствора холинэстеразы или сыворотки крови лошади. Затем в пробирку № 1 добавляют экстракт из патматериала, а в про­бирку № 2 - дистиллированную воду. Содержимое хорошо переме­шивают и ставят на водяную баню при температуре 39-40°С на 30 мин. По истечении этого времени в пробирку № 3 вносят 0,5 мл содержимого из опытной пробирки № 1, а в контрольную пробирку (№ 4) - 0,5 мл из контрольной (№ 2). В каждую пробирку приливают по 4,5 мл раствора № 3 и сразу отмечают время начала реакции. Затем в отдельную пробирку (№ 5) помещают 0,5 мл содержимого из конт­рольной пробирки (№ 2) и добавляют 4,5 мл раствора № 2 Эта про­бирка является колориметрическим стандартом (см. схему) В даль- нейшем отмечают время уравнения (в минутах) цвета жидкости в опытной и контрольной пробирках с цветом колориметрического стандарта. Процент угнетения активности холинэстеразы вычисляют по формуле:

где X - угнетение активности холинэстеразы, %;

В - время уравнения цвета жидкости в контрольных пробирках с

цветом стандарта;

в - время уравнения цвета жидкости в опытных пробирках с цве­том стандарта.

Схема определения активности холинэстеразы

Угнетение активности холинэстеразы на 10% и более свиде­тельствует о наличии ФОС в исследуемом материале.

Количественное определение ФОС проводят по калибровочному графику, построенному по препарату, наличие которого предполага­ется в исследуемом материале. Если подозревается незвестное ФОС, то калибровочный график строят по одному из ядохимикатов, пере­численных выше. Для этого необходимо иметь химически чистое ве­щество или препарат с известным содержанием активно действующего вещества (ДВ). Из заведомо чистого образца исследуемого материала (мышцы, орган или другой образец) в склянки с притертыми пробками берут 5 навесок по 10 г и вносят в них соответственно 1,0; 5,0; 10,0; 20,0; 50,0 мкг препарата по ДВ. Через 30 мин. каждую навеску за­ливают 10 мл хлороформа и экстрагируют один час. Хлороформенные экстракты исследуют в описанном выше порядке. По оси ординат откладывают процент угнетения активности холинэстеразы в каждой

пробе, а по оси абсцисс-количество препарата (в мг/кг) по ДВ. Зави­симость процента угнетения активности холинэстеразы от концент­рации ФОС в исследуемом материале (примерный калибровочный гра­фик) представлена в таблице.

Угнетение активности холниэстеразы в зависимости от содержания хлорофоса в молоке (мг/л) __

Работа 2. Токсическое действие хлорофоса и лечение отравления

Материальное оснащение: кролик, шприцы, вата, спирт 10%-ный раствор хлорофоса, 0,1.%-ный раствор атропина сульфата.

Ход опыта. Кролику ввести под кожу в области спины 10%-ньн раствор хлорофоса из расчета 180 мг на 1 кг массы по ДВ. Через 15-30 мин, когда возникнет яркая картина отравления, ввести 0,1%-ньп раствор атропина сульфата под кожу в количестве 3 мл (или внутри венно 2 мл). Повторно атропин ввести через 45 мин. Протокол весп по схеме:

Задание по фармакотерапии

Выписать в рецептах и объяснить действие препаратов 1.10 овцам - 1,5%-ный раствор атропина сульфата.

2. Корове - комплексный антидот, состоящий из 1,5%-ного рас­твора атропина сульфата, 10%-ный раствор тропацина и 20%-ный рас­твор дипироксима.

3. 10 телятам - лекарственную смесь, состоящую из 0,9%-ного раствора натрия хлорида, 10%-ного раствора кальция хлорида, калия хлорида, тиамина бромида и аскорбиновой кислоты.

4. Лошади средство при сердечной слабости.

5. Витамины Bt и С для устранения параличей и слабости ске­летной мускулатуры.

6. Рассчитать потребность в атропине сульфате для 50 лошадей при отравлении фосфорорганическими соединениями.

Вопросы программированного контроля по токсикологии фосфорорганических соединений

I. Применение фосфорорганических соединений в сельском хозяй­стве.

1. Гербициды. 2^ Инсектициды. 3< Акарициды. 4. Нематоциды. 5. Фунгициды. 6. Бактерициды. 7.3ооциды. 8.Дефолианты.

П. Фосфорорганические инсектициды контактного действия.

1. Байтекс. 2. Антио. 3. Бромофос. 4. Амифос. 5. ДДВФ. 6. Метил-меркаптофос. 7. Тиофос. 8. Октаметил. 9. Трихлорметафос-3. 10. Пре­парат М-81. 11. Фталофос. 12. Фосфамид. 13- Хлорофос.

III. Фосфорорганические инсектициды системного действия

1. Байтекс. 2. Антио. 3. Бромофос. 4. Амифос. 5. ДДВФ. 6. Метил-меркаптофос. 7. Тиофос. 8. Октаметил. 9. Трихлорметафос-3. 10. Пре­парат М-81. 11.Фталофос. 12. Фосфамид. 13. Хлорофос.

IV. Фосфорорганические инсектициды, применяемые для защиты животных от кровососущих насекомых.

1. Контактного действия. 2. Системного действия.

V. Срок выжидания после обработки растений фосфорорганиче­скими инсектицидами контактного действия.

1. Не ранее 6 дней. 2. Не ранее 6 недель.

VI. Срок выжидания после обработки растений фосфорорганич­ескими инсектицидами системного действия

1. Не ранее 6 дней. 2. Не ранее 6 недель.

VII, Основные свойства фосфорорганических инсектицидов.

1. Высокая токсичность для насекомых и клещей. 2. Низкая ток­сичность для насекомых и клещей. 3. Высокая токсичность для чело­века и животных. 4. Низкая токсичность для человека и животных. 5. Узкий спектр действия. 6. Широкий спектр действия. 7. Являются липоидотропными веществами. 8. Хорошо всасываются через слизи­стые оболочки и кожу. 9. Обладают кумулятивным действием. 10. Ку­муляция отсутствует. 11. Большой расход на единицу обрабатываемой площади. 12. Малый расход на единицу обрабатываемой площади.

УШ. Что следует понимать под термином "летальный синтез"?

1. Превращение пестицида в организме в менее токсическое со­единение. 2. Превращение пестицида в организме в более токсическое соединение.

IX. Основные механизмы токсического действия фосфороргани­ческих соединений.

1. Образование в организме карбоксигемоглобина, 2. Образование метгемоглобина. 3. Угнетение активности холинэстеразы. 4. Угнетение активности Na+, K+, АТФ-азы.

X. Основные симптомы острого отравления фосфороганически-ми соединениями.

1. Бронхоспазм. 2. Расширение бронхов. 3. Судороги. 4. Мышеч­ные подергивания. 5. Сухость во рту. 6. Обильная саливация. 7. Уси­ление перистальтики кишечника. 8. Атония кишечника. 9. Частое мо­чеиспускание. 10. Анурия. 11. Миоз. 12. Мидриаз.

XI. Диагностическое значение определения активности холин­эстеразы при отравлении фосфорорганическими соединениями.

\. Основное. 2. Ориентировочное.

ХП. Метод изоляции фосфорорганических соединений из биоло­гического материала при химико-токсикологических исследованиях.

1. Подкисленной водой. 2. Перегонкой с водяным паром. 3. Ор­ганическими растворителями. 4. Минерализация.

XIII. Укажите препараты, которые следует применять при от­равлении фосфорорганическими соединениями.

\. Карбахолин. 2. Атропин. 3, Пилокарпин. 4. Тропацин. 5. Реак-тиваторы холинэстеразы. 6. Унитиол.

XIV. Фосфорорганические пестициды, присутствие которых не­допустимо в кормах для сельскохозяйственных животных.

1. Карбофос. 2. Хлорофос. 3. Фосфамид. 4. Трихлорметафос-3. 5. Метилмеркаптофос. 6. Тиофос. 7. Меркаптофос. 8. Октаметил.

XV. Указать Фосфорорганические пестициды максимально допу­стимый уровень которых в кормах для животных составляет не более 2 мг на 1 кг корма.

1. Карбофос. 2. Хлорофос. 3. Фосфамид. 4. Трихлорметафос-3. 5. Метилмеркаптофос. 6. Тиофос.