2.3 Методы количественного определения

Нормативным методом количественного определения индивидуальных препаратов является кислотно-основное титрование в неводной среде.

Кроме того возможны и другие способы количественного определения:

- алкалиметрия по остатку связанной соляной кислоты;

- гравиметрия (весовой формой может быть основание препарата, или продукт взаимодействия с общеалкалоидными осадительными реактивами);

- метод Кьельдаля;

- нефелометрия (по взаимодействию с общеалкалоидными осадительными реактивами);

- экстракционная фотометрия (по взаимодействию препаратов как слабых оснований с кислотными индикаторами, например, метиловым оранжевым, бромтимоловым синим, бромфеноловым синим и др.);

- другие физико-химические методы (спектрофотометрия, ВЭЖХ).

Количественное определение препаратов в лекарственных формах (драже, таблетках, растворах для инъекций) осуществляют с помощью различных физико-химических методов (УФ - спектрофотометрия, фотоэлектроколориметрия), а также методом Кьельдаля и цериметрически.

Для испытания подлинности производных фенотиазина используют спектрофотометрию в УФ - области. ФС рекомендует устанавливать удельный показатель поглощения при испытании трифлуоперазина дигидрохлорида (0,001% - ный раствор в 0,01М растворе хлороводородной кислоты при длине волны 256 нм). УФ - спектр раствора промазина гидрохлорида в 0,01М растворе хлороводородной кислоты имеет в области 230 - 380 нм два максимума поглощения - при 252 и 302 нм. УФ - спектр 0,0005% - ного раствора прометазина шидрохлорида в тех же условиях имеет максимумы светопоглощения при 249 и 300 нм, хлорпромазина гидрохлорида - при 254 и 307 нм. Подлинность левомепромазина гидрохлорида устанавливают по идентичности УФ - спектров испытуемого и стандартного растворов.

А.П. Арзамасцевым с сотрудниками систематизированы сведения о применении УФ и ИК - спектроскопии для оценки подлинности 12 лекарственных веществ, производных фенотиазина. Установлено, что оптимальный растворитель для УФ - спектроскопии - этанол. УФ - спектры 10 - алкилпроизводных фенотиазина имеют по два максимума поглощения в области 290-330 нм; у 10 - ацилпроизводных наблюдается гипсохромное смещение обоих максимумов. ИК - спектры, снятые после прессования в таблетках бромида калия на двухлучевом ИК - спектрофотометре в области 4000-250 см-1, насчитывают по 20-25 полос поглощения. Основным отличительным признаком ИК - спектров 10 - алилпроизводных (от 10 алкилпроизводных) служат максимумы поглощения в области 1680-1660 см-1, обусловленные наличием в молекуле амидного карбонила. Другие полосы поглощения, связанные с особенностями химической структуры, позволяют отличать друг от друга производные фенотиазина (ФС).

ВЭЖХ оказалась перспективной для контроля качества лекарственных веществ 10 - алкил - и 10 ацилпроизводных фенотиазина. Разработаны четыре варианта селективного разделения 16 производных данной группы, которые можно использовать для идентификации, контроля чистоты и количественного определения в лекарственных формах [2].

Хроматографические методы анализа биообъектов, как правило, требуют пробоподготовки. Подготовка образца к анализу проводится различными способами (жидкость - жидкостная экстракция, твердофазная экстракция).

Авторы [7] изолировали 83% хлорпромазина из печени и почек экстракцией подщелоченным эфиром.90% промазина можно выделить из человеческой плазмы методом жидкость-жидкостной экстракции смесью пентан: 2-пропанол (98: 2) [8]. В работе [9] 13 производных фенотиазина экстрагировали из гомогенизированных тканей мозга тетрагидрофураном, после центрифугирования и выпаривания остаток растворяли в воде. При таком способе пробоподготовки извлекается 85% производных фенотиазина. Хлорпромазин из крови и прометазин из тканей мозга экстрагируют смесью гептана и изоамилового спирта (99:

1) [10]. Пробоподготовку в работе [11] предложено проводить методом экстракции гептаном. Ткани (печень, мозг) предварительно гомогенизировали. У цельной крови, плазме после осаждения 10% гидроксидом натрия добавляли 1,5% раствор амилового спирта в гептане, после центрифугирования органическую фазу отмывали ацетатным буферным раствором (рН 5,6), добавляли раствор 0,1 моль/л хлористоводородной кислоты и после повторного центрифугирования хроматографировали. Предложена методика изолирования хлорпромазина экстракцией хлороформом [12]. Полученный хлороформный слой фильтруют, высушивают, сухой остаток растворяют в небольшом количестве подвижной фазы.

Недостатком жидкостной экстракции является ее трудоемкость, большое число длительных стадий.

Альтернативой для жидкостной экстракции аналитов из твердых образцов служит сверхкритическая флюидная экстракция [13].

При работе с жидкими образцами и первоначальными экстрактами классические методы пробоподготовки можно заменить значительно более удобным методом твердофазной экстракции (ТФЭ) - сорбционным методом подготовки пробы, в котором аналиты переводятся из жидкого образца в твердую фазу концентрирующего сорбента [14].

Смыв аналитов с адсорбента осуществляется сравнительно небольшим объемом растворителя (в пределах десяти миллилитров), что дает возможность либо сразу применить полученный концентрат для анализа [15, 16], либо дополнительно сконцентрировать пробу через стадию получения сухого остатка, испарив растворитель в токе инертного газа [17], не прибегая к использованию роторного испарителя (как при жидкостной экстракции).

Для выделения производных фенотиазина и их активных метаболитов часто применяется концентрирующий картридж Sep-Pak С 18 [13, 18, 19, 20]. В работе [21] предлагается использовать концентрирующий картридж с сорбентом Amberlite XAD-2. Авторы [22] для выделения хлорпромазина и его сульфоксида использовали картридж с цианоприлом.

В описанных выше методах ТФЭ стадии пробоподготовки и идентификации аналитов аппаратурно разделены, поэтому подготовленная проба может быть сохранена и позже проанализирована несколькими различными аналитическими методами.

В некоторых случаях [23] концентрирующий картридж с сорбентом напрямую соединен с аналитической колонкой жидкостного хроматографа; в этом случае проба не выделяется, а сразу анализируется методом ВЭЖХ.

Благодаря неоспоримым преимуществам перед жидкость-жидкостной экстракцией, метод твердофазной экстракции уже более двух десятков лет является объектом интенсивных исследований в области адсорбционных технологий и находит применение и при анализе производных фенотиазина.

Известной альтернативой тщательной пробоподготовки является применение предколонки, защищающей основную колонку от загрязнения. В качестве сорбента предколонки используются поливиниловые смолы, TSK Gel HW-65 [24], диметилсилан (RP-2) [25], Inersil ODS-SP [26].

Иногда пробоподготовку целесообразно не проводить, а добавить в аппаратную схему перед основной колонкой фильтр и предколонку. Преимуществами этой схемы являются простота и экспресс - ность анализов при меньшей затрате труда и реагентов.

10-алкилпроизводные фенотиазина легко окисляются на воздухе, особенно в присутствии света, поэтому образцы проб хранятся при низкой температуре.

Количественное содержание хлорпромазина, прометазина, профенамина, левомепромазина, перазина, прохлорперазина, трифлюоперазина, тиопроперазина, перфеназина, флюфеназина, проперициаина и тиоридазина оставалось неизменным при хранении образцов плазмы в течение 3 месяцев при - 20°С [26].

Проведено сравнительное изучение концентраций хлорпромазина и шести его метаболитов в плазме, образцы которой хранились при температуре - 20°С в течение 24 часов, при - 20°С - в течение недели, при - 70°С - в течение 4 недель и при - 70°С - в течение 3 и 12 месяцев [27]. Существенных различий в концентрациях изучаемых производных фенотиазина при хранении в атмосфере жидкого азота обнаружено не было.

Пробоотбор, пробоподготовку биоматериала, содержащего производные фенотиазина, авторы [12] рекомендуют проводить в пробирках темного цвета.

Основные хроматографические параметры ВЭЖХ определения 10 - алкилпроизводных фенотиазина указаны в таблице 1. Для определения содержания большинства производных фенотиазина используется обращенно-фазовый вариант хроматографирования, реже применяется нормально-фазовое хроматографирование [10, 16]. Анализ обычно выполняется при комнатной температуре. Скорость подвижной фазы составляет 1,0 - 1,5 мл/мин.

Обычно используются спектрофотометрические или флуориметрические детекторы, работающие в диапазоне 250 - 254 нм или при 1ex=250-340 нм и 1em=280 - 525, соответственно. Применяются электрохимические детекторы (кондуктометрические, вольтамперометрические, кулонометрические). Наибольшее применение электрохимические детекторы нашли в обращенно-фазовой ВЭЖХ, в которой используют полярные элюенты. В нормально-фазовой ВЭЖХ также можно применять электрохимическое детектирование, если после разделительной колонки в неполярную подвижную фазу добавить электролит или подходящий растворитель с высокой диэлектрической проницаемостью [28]. При серийных анализах по контролю качества продукции химического производства и лекарственных средств, а также следов производных фенотиазина и метаболитов в самых разных объектах стали применяться высокочувствительные масс-спектрометрические детекторы [7, 8, 10, 29].

Важным параметром является рН подвижной фазы, которое, как правило, создается буферным раствором (ацетатным, фосфатным, формиатным). Значения рН варьируют от 3,0 до 5,6, что согласуется с величиной pKBH+ исследуемого фенотиазина или его метаболитов. В [30] приводится значение pKBH+ протонированного атома азота в фенотиазиновом ядре для аминазина и других ФНТ, приблизительно равное 4.

Классическим адсорбционным материалом, как для нормально-, так и для обращенно-фазового хроматографического исследования производных фенотиазина, является силикагель (в названиях силикагельных фаз присутствует метка Silica или Sil).

По типу применяемых неподвижных фаз хроматографические методы анализа азотсодержащих веществ можно классифицировать следующим образом.

При хроматографировании на обращенных фазах "старого" типа (Silasorb C18, Separon C18, LiChrosorb RP-18) соединения группы производных фенотиазина элюируются в виде уширенных асимметричных пиков. Этот эффект объясняется [15] взаимодействием основных адсорбатов с силикагельной матрицей, содержащей "активные силанолы" и примеси металлов. Для блокирования поверхности силикагеля необходимо динамически модифицировать адсорбент, что достигается добавлением в водно-органическую подвижную фазу 0,1-1% алифатического амина, к примеру, триэтиламина [12, 20, 22, 24, 29, 31 - 34]. Для регулирования рН в диапазоне от 3,0 до 5,0, применяются фосфорная, муравьиная, уксусная кислоты [16, 33, 35, 36], а также различные буферные растворы (ацетатный, формиатный, фосфатный).

Применение динамического модифицирования позволит в большинстве случаев увеличить эффективность разделения до приемлемого уровня. Тем не менее, такие системы обладают рядом недостатков. Применение алифатических аминов может привести к появлению на хроматограмме ряда системных пиков. Особенно сильно этот негативный эффект проявляется при детектировании в коротковолновой УФ - области. Для правильной интерпретации хроматограммы достаточно провести перед анализом контрольное элюирование и идентифицировать все системные пики - как положительные, так и отрицательные [28].

Современным направлением является анализ на обращенных фазах "нового" типа, полученных на основе соль-геля (sol-gel), с последующим интенсивным эндкеппингом (Wakosil II C18RS, Zorbax Eclipse XDB C18, Hypersil BDS C18), модифицированного лигандами с полярной группой (Discovery Amide C16, Symmetry Shi eld C18), а также на основе силикагеля "гибридного" типа, получаемого полимеризацией алкилсилоксанов (XTerra).

Кроме физико-химических методов для испытания производных фенотиазина применяют химические реакции окисления, соле- и комплексообразования, обнаружения атомов азота, серы, хлорид - иона. В большинстве испытаний подлинности используют способность производных фенотиазина легко окисляться с образованием окрашенных продуктов. Так, при действии 10% - ным раствором хлорамина Т появляется фиолетовая или красно - фиолетовая окраска, переходящая в слой хлороформа. В качестве окислителей могут быть применены бромная вода, азотная кислота, хлорид железа (III), пероксид водорода, концентрированная серная кислота. Реакции эти в большинстве своем малоспецифичны, т.к. образуются смеси продуктов окисления, имеющие красное, вишнево-красное, красно-оранжевое, малиновое окрашивание.

Более специфичным из перечисленных реактивов на фенотиазиновое ядро является бромная вода. Этот реактив используют для отличия производных фенотиазина друг от друга (растворы лекарственных веществ нагревают до кипения с бромной водой) (табл. 2.1).

Таблица 2.1

Цветные реакции производных фенотиазина с бромной водой

Окрашенные продукты, получающиеся при нагревании производных фенотиазина с бромной водой, обусловлены образованием пербромпроизводных катиона фенотиазония. Фенотиазин при окислении бромом образует окрашенный в красный цвет пербромфенотиазоний (рис.2.2):

Рис. 2.2 Цветные реакции производных фенотиазина с бромной водой

Вместо нестойкого и токсичного реактива - бромной воды был предложен и включен в ФС для подлинности 10 - алкилпроизводных фенотиазина (промазина, прометазина, хлорпромазина, трифлуоперазина гидрохлоридов) 1% - ный раствор калия бромата в присутствии 0,15 мл разведенной хлороводородной кислоты. Водные или водно-спиртовые 0,1% - ные растворы указанных лекарственных веществ приобретают розовое или розово-оранжевое окрашивание, постепенно переходящее в малиновое или коричневое. В отличии от других из окрашенного раствора прометазина гидрохлорида выпадает осадок вишнево - красного цвета.

Для идентификации 10 - ацилпроизводных фенотиазина морацизина гидрохлорид и этацизин рекомендовано использовать в качестве реактива 1% - ный раствор калия бромата, но после предварительного гидролиза с разведенной хлороводородной кислотой (при нагревании в течение 15 мин). Последующая методика выполнения такая же, как и для 10 - алкилпроизводных фенотиазина. Указанная группа производных фенотиазина образует также окрашенные продукты окисления со щелочным раствором гидроксиламина при рН 4,0. Окраска зависит от характера радикала в положении 2 [3].

Левомепромазин под действием концентрированной серной кислоты приобретает сиреневое окрашивание. Для идентификации производных фенотиазина можно использовать реакцию с концентрированной серной кислотой или с 50-60% - ным растворами этой кислоты в присутствии других окислителей. Для некоторых производных фенотиазина добавляют в рнакционную смесь ванадат аммония (реактив Манделина). При добавлении к водному раствору прометазина гидрохлорида порошка оксида свинца в верхнем слое не должно быть красного окрашивания, но он медленно становится синеватым. Образуются и другие продукты окисления, имеющие максимумы поглощения в УФ - и видимой областях спектра. Положительные результаты дают указанные химические реакции при анализе левомепромазина. При добавлении к раствору левомепромазина 1 мл 37% - ного раствора формальдегида и нескольких капель 0,1М раствора сульфата церия появляется интенсивная лиловая окраска. В основе этих испытаний лежит процесс окисления производных фенотиазина, который в зависимости от химической структуры протекает при нагревании или при комнатной температуре.

Наибольшей реакционной способностью в молекулах производных фенотиазина отличается атом серы, который способен окисляться с образованием различных веществ. Продуктами окисления 10-замещенных фенотиазинов являются парамагнитные катион - радикалы фенотиазония (I), которые при последующем окислении превращаются в диамагнитные ионы феназтиония (II). Последние при взаимодействии с водой образуют сульфоксиды (III), сульфоны и 3 - ониевые продукты (рис.2.3):

Рис. 2.3 Реакционная способность в молекулах производных фенотиазина

Таким образом, конечным продуктами окисления могум быть 9 - S - оксид, 9,9 - диоксид (сульфон), 3-окси - , 3,7 - диокси - , 3 - он - , 3 - окси - 7-он - фенотиазины.

В отличие от других производных фенотиазина с трифлуоперазина гидрохлоридом концентрированная серная кислота образует не окрашенный продукт, а желеобразный осадок. Под действием азотной кислоты образуются окрашенные в темно - красный цвет продукты взаимодействия с прометазина и хлорпромазина гидрохлоридами. Окраска переходит в желтую, раствор хлорпромазина гидрохлорида при этом мутнеет. Растворы морацизина гидрохлорида и этацизина в разведенной хлороводородной кислоте после кипячения окрашиваются в сиреневый цвет, но раствор у этацизина мутнеет, а у морацизина гидрохлорида от добавления нитрата натрия окраска переходит в зеленый, а затем в желтый цвет (реакция на морфолиновый цикл).

В качестве реактивов для идентификации используют также красители. Общим реактивом на производные фенотиазина является метиленовый синий, который в виде 0,1%-ного раствора в присутствии концентрированной серной кислоты образует окрашенные продукты реакции. Хлорпромазина гидрохлорид приобретает пурпурное окрашивание, промазина гидрохлорид - светло-коричневое, прометазина гидрохлорид - пурпурно-коричневое, трифлуоперазина гидрохлорид - серовато-зеленое.

Ацетоновый раствор малеинового ангидрида является групповым реактивом на производные фенотиазина. Продукты реакции приобретают желто - оранжевое окрашивание, максимумы светопоглощения растворов находятся в области 336-360нм.

Окрашенные в красный цвет комплексные соединения с производными фенотиазина образуют ионы железа (III), ртути (II), кобальта, палладия, платины. Раствор прометазина гидрохлорида после добавления нитрата серебра в 0,002 М растворе серной кислоты после нагревания на водяной бане приобретает вишнево-красное окрашивание. Осадки белого цвета образуют с растворами некоторых производных фенотиазина тиоцианат калия, оксалат аммония, гексацианоферрат (III) калия, а нитропруссид натрия дает красный осадок (прометазина и хлорпромазина гидрохлориды). Производные фенотиазина образуют окрашенные осадки при взаимодействии с тиоцианатоацидокомплексами железа, кобальта и никеля и белые осадки - с тиоцианатоацидокомплексами цинка и кадмия. Осадки растворяются в бензоле, хлороформе, дихлорэтане.

Кобальтинитрит (гексанитрокобальтат) натрия в присутствии уксусного ангидрида образует с производными фенотиазина при нагревании вещества, имеющие красное окрашивание. Трифлуоперазина гидрохлорид в этих условиях окрашивается в зеленый цвет. Раствор йодмонохлорида с прометазина, хлорпромазина гидрохлоридами и трифлуоперазина гидрохлоридом образует бурого цвета осадки. При последующем добавлении насыщенного водного раствора сульфаниловой кислоты и этанола прометазина гидрохлорид приобретает зеленое, а хлорпромазина гидрохлорид и трифлуоперазина гидрохлорид - фиолетовое окрашивание.

Наличие атома серы в молекулах производных фенотиазина устанавливают после прокаливания с карбонатом натрия и нитратом калия. Образовавшийся сульфат - ион обнаруживают в фильтрате, используя в качестве реактива раствор хлорида бария. Атом азота подтверждают с помощью общеалколоидных реактивов, в частности раствора йода в йодиде калия (реактив Вагнера - Бушарда).

Трифлуоперазина гидрохлорид с раствором пикриновой кислоты выделяет пикрат, имеющий стабильную температуру разложения (240-243⁰С). Пикраты могут образовывать и другие производные фенотиазина, в т. ч. прометазина гидрохлорид (160⁰С), хлорпромазина гидрохлорид (177⁰С) и др. Карбэтоксигруппу в молекулах морацизина гидрохлорида и этацизина обнаруживают по образованию йодоформа после действия раствором йода в щелочной среде:

Общим испытанием на производные фенотиазина является реакция осаждения оснований из водных растворов при действии раствором гидроксида натрия (основание выпадает в виде белого осадка). Осадок отфильтровывают и в фильтрате обнаруживают хлориды по реакции с раствором нитрата серебра.

Атом фтора в молекулах фторсодержащих производных фенотиазина (трифлуоперазина гидрохлорид) обнаруживают после сжигания в кислороде до образования фторид - иона. Его затем открывают цветной реакцией с ализариновым красным С в присутствии нитрата циркония. Смесь этих реактивов (ализаринат циркония) имеет екрасно - фиолетовое окрашивание. При добавлении фторид - иона оно переходит в желтое (окраска свободного ализарина).

Дифференцировать производные фенотиазина можно с помощью метода ТСХ на пластинках Силуфола УФ - 254 в системе растворителей этилацетат - этанол - диэтиламин (17: 2: 0,5). После хроматографирования и проявления парами йода в зависимости от характера заместителя в положении 2 зоны адсорбции приобретают сине - зеленое (промазина, прометазина, хлорпромазина гидрохлориды). Кроме того, идентифицировать можно по различающимся средним значениям R_f. Метод ТСХ использован в НД для установления подлинности левомепромазина в таблетках. Основные пятна хроматограмм испытуемого и стандартного растворов должны быть идентичными по размерам, окраске и величине R_{f (}около 0,7). Этим же методом обнаруживают посторонние примеси при испытании на чистоту производных фенотиазина. Для установления примесей используют, как правило, пластинки силуфол УФ - 254. Хроматографируют восходящим методом параллельно с растворами свидетелей в системе растворителей гексан - ацетон - диэтиламин (50: 20: 2) или хлороформ - диэтиламин (9:

1). Детектируют хроматограммы в УФ - свете при 254 нм. Допустимое содержание примесей устанавливают по количеству, расположению, размеру и интенсивности пятен на хроматограмме в сравнении со свидетелями. Суммарное содержание примесей (ФС) не должно превышать у прометазина гидрохлорида 1,5%, хлорпромазина гидрохлорида 2%, морацизина гидрохлорида 1%.

Количественное определение производных фенотиазина выполняют различными вариантами метод титрования в неводных средах. Титрантом во всех случаях является раствор хлорной кислоты. используя в качестве растворителя ацетон и индикатор метилового оранжевого (в ацетоне), титруют промазина, прометазина, хлорпромазина гидрохлориды. В других случаях растворителем служит ледяная уксусная кислота (трифлуоперазина гидрохлорид), а индикатором - кристаллический фиолетовый. Указанные условия титрования возможны в присутствии ацетата ртути (II).

Для гидрохлоридов 10 - алкилпроизводных фенотиазина процесс неводного титрования происходит по следующей схеме (рис. 2.4):

Рис. 2.4 Процесс неводного титрования

Используют также (ФС) варианты титрования в неводной среде без добавления ацетата ртути (II). Например, гидрохлориды 10 - алкилпроизводных фенотиазина (морацизина гидрохлорид, этацизин) можно оттитровать в смеси муравьинной кислоты, уксусного ангидрида и бензола (1: 30: 20) с индикатором кристаллическим фиолетовым. Химизм этого процесса рассмотрен также на примере определения эфедрина гидрохлорида. Не требуется добавления ацетата ртути (II) при определении хлорпромазина гидрохлорида в среде уксусного ангидрида при условии использования в качестве индикатора малахитового зеленого, при титровании прометазина гидрохлорида с индикатором кристаллическим фиолетовым, но в смеси муравьинной кислоты и уксусного ангидрида (1: 20), а также промазина гидрохлорида с тем же индикатором в смеси ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и бензола (1,5: 20: 5).

Определить содержание производных фенотиазина можно алкалиметрическим методом, титруя 0,1 М водным раствором гидроксида натрия (индикатор фенолфталеин). Для извлечения выделяющегося органического основания добавляют хлороформ (рис. 2.5):

Рис. 2.5 Алкалиметрический метод

Восстановительные свойства производных фенотиазина положены в основу цериметрического определения. Сущность методик заключается в растворении навески (0,02-0,03г) в 10 мл метанола, нагревании до кипения, охлаждении, пробавлении 10 мл разведенной серной кислоты и титранта окрашивания. Таким образом, титрование выполняют без использования индикатора.

Йодометрическое определение хлорпромазина гидрохлорида основано на образовании полийодида. Описано его броматометрическое определение, суть которого состоит в титровании 0,1 М раствором бромата калия раствора навески в 2 М растворе хлороводородной кислоты в присутствии бромида калия до обесцвечивания появляющейся красной окраски. Йодхлорометрическое определение промазина и хлорпромазина гидрохлоридов заключается в выделении эквивалентного количество йода после отделения и разложения образовавшегося продукта присоединения (RN) ₂ · ICI:

Количественное определение левомепромазина выполняют методом двухфазного титрования с использованием титранта 0,01 М раствора лаурилсульфата натрия и индикатора диметилового желтого в присутствии хлороформа.

Известны также способы косвенного комплексонометрического титрования производных фенотиазина. Количественное определение производных фенотиазина в лекарственных формах выполняют спектрофотометрическим методом (промазина, хлорпромазина гидрохлориды, левомепромазина и др.) в указанных выше максимумах поглощения. Широко используют для фотоколориметрического определения цветные реакции, основанные на окислении и комплексообразовании. Точность сопоставимую с титриметрическим методами, позволяет достигнуть дифференциальное спектрофотометрическое и экстракционно-фотометрическое определение с тиоцианатоацидокомплексом кобальта [2].