2.3 Выделение Enterobacteriaceae из исследуемого материала

Этот этап заключается в изучении характера роста на питательной среде, интерпретации визуальной характеристики выросших колоний и отборе их для получения чистой культуры и первичной идентификации. Учитывают прежде всего морфологическую характеристику колоний, пигментообразование, наличие специфического запаха (например, у бактерий рода Citrobacter), изменение цвета среды. Ведущее значение имеет дифференциация по окраске изолированных колоний, которую определяют особенности метаболизма бактерий в отношении дифференцирующих субстратов питательной среды. Таким субстратом в большинстве случаев является лактоза. Соответственно и колонии, образованные бактериями, не расщепляющими ее, выглядят бесцветными или имеющие оттенок цвета самой среды. Такие колонии подлежат первоочередному отбору (отсеву), так как могут быть образованы патогенными энтеробактериями (шигеллами, сальмонеллами и т.д.) и условно-патогенные энтеробактерии (УПЭ) (гафния, провиденция, серрация и др.) Многие штаммы УПЭ способны ферментировать лактозу с различной интенсивностью и образуют разной степени окрашенные колонии. Поэтому для дальнейшего изучения следует отсевать не менее 3-5 колоний каждого вида, особенно при первичной этиологической расшифровки диарейных заболеваний в очагах [Гиссенс, 2001].

Методика взятия колоний для выделения чистой культуры проста, но имеет большое значение. Дело в том, что используемые питательные среды (особенно высоко селективные) действуют в основном бактериостатически и микробы-спутники, не развиваясь на них, сохраняют жизнеспособность, а значит представляют опасность загрязнения колоний искомых энтеробактерий. Колонию следует снимать тонкой бактериологической петлей прикосновением к центру колоний. Недопустимо охлаждение петли о визуально свободную от роста поверхность среды. Отобранные колонии отсевают на многотестовые (комбинированные) среды для накопле­ния чистой культуры и ее предварительной идентификации [Определение чувствительности микроорганизмов…, 2004].