2.4 Методы идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae

Со среды Эндо снимают подозрительные колонии и засевают уколом в столбик среды Олькеницкого. После 24-часовой инкубации при 37ºC делают предварительное заключение о родовой принадлежности выделенных культур [Зубков, 2002].

На поверхности среды Олькеницкого наблюдается влажный однородный рост без пигментообразования. По изменению окраски столбика среды учитывают способность ферментировать глюкозу, а по изменению окраски скошенной части ферментировать лактозу. Для определения родовой принадлежности проводят:

- Определение подвижности в полужидкой среде Кларка. При росте микроорганизмов по ходу укола судят об отсутствии подвижности;

- Определение использования цитрата.

Посев производят 18-часовой культуры на среду Симмонса. Инкубируют при 37ºC 18–20 часов. Рост культуры и изменение окраски в синий цвет свидетельствуют о положительной реакции. Кишечная палочка в отличие от других кишечных бактерий роста не дает;

- Определение декарбоксилаз аминокислот. Посев производят в среду с аминокислотами (лизин, орнитин, аргинин) и контрольную среду, вносят стерильное вазелиновое масло, инкубируют при 37ºC 24 часа. Затем добавляют 4–5 капель 10% раствора хлорида железа (3). Появление интенсивно-зеленой окраски свидетельствует о положительной реакции;

- Видовая дифференциация на среде Гисса по реакциям «пестрого ряда» [Зубков, 2002].

Также идентификация микроорганизмов проводилась при помощи времяпролетной масс-спектрометрии (MALDI). Матрично-активированная лазерная десорбция/ионизация, МАЛДИ — (от англ. MALDI, Matrix Assisted Laser Desorbtion/Ionization) — десорбционный метод«мягкой» ионизации, обусловленной воздействием импульсами лазерного излучения на матрицу с анализируемым веществом. Матрица представляет собой материал, свойства которого обусловливают понижение деструктивных свойств лазерного излучения и ионизацию анализируемого вещества. В баклаборатории ГБУЗ ККБ№ используют метод МАЛДИ масс-спектрометрии по белковому профилю бактерий [Определение чувствительности микроорганизмов…, 2004].