Определение санитарно-микробиологических показателей качества воды.

Цели занятия:

- определить общее микробное число в пробах воды, отобранных из различных источников;

- ознакомиться с методиками определения основных санитарно-микробиологических показателей качества воды;

- ознакомиться с основной нормативно-технической документацией, нормирующей санитарно-микробиологические показатели качества воды.

Вопросы для самоконтроля:

1. С какой целью производится очистка сточных вод?

2. Виды сточных вод.

3. Дайте понятие качества воды.

4. Основные санитарно-микробиологические показатели качества воды.

5. Общие требования к отбору проб воды.

Вводная часть:

Водные экосистемы являются средой обитания микроорганизмов. Первичными продуцентами служат одноклеточные водоросли. В пищевую цепь входят бактерии и простейшие. Микрофлора воды чаще всего отражает микробный пейзаж почвы около водоема, постоянно меняется и обновляется, что связано с попаданием различных бактерий с ливневыми, талыми, сточными водами, с пылью, из организма живущих в водоеме рыб, гниющих растений. Микрофлора в пресных и соленых водоемах различна.

С ливневыми, талыми и сточными водами в реки и озера попадают микроорганизмы – представители нормальной микрофлоры кишечника человека и животных, например, кишечная палочка, энтерококки, различные клостридии. Вместе с ними могут попасть и патогенные микроорганизмы (брюшнотифозные, дизентерийные бактерии, холерные вибрионы, вирусы полиомелита, гепатита), которые сохраняются от нескольких дней до недель.

Именно поэтому водный путь передачи является одним из возможных факторов распространения кишечных инфекций.

В настоящее время в питьевой воде оценивают следующие санитарно-микробиологические показатели:

1) общее микробное число – общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37^оС в течение 24 ч, видимые с увеличением в два раза (должно быть не более 50 в 1 мл питьевой воды);

2) общие колиформные бактерии – грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (37±1) ^оС в течение (24-48)ч (отсутствие в трех пробах по 100 мл);

3) термотолерантные колиформные бактерии входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (44±0,5)^оС в течение 24 ч (должны отсутствовать);

4) колифаги – бактериальные вирусы, способные лизировать E. coli и формировать при температуре (37±1) ^оС через (18±2) ч зоны лизиса бактериального газона (бляшки) на питательном агаре (отсутствие в 100 мл воды), определяются только в системе водоснабжения из поверхностных источников перед подачей в систему водораспределения;

5) споры сульфитредуцирующих клостридий (спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, редуцирующие сульфит натрия на железо-сульфитном агаре при температуре (44±1)^оС в течение (16-18) ч) должны отсутствовать в 20 мл воды, показатель используется для оценки эффективности очистки воды;

6) цисты патогенных простейших кишечника (лямблий, амебы дизентирийной, балантидия) и яйца гельминтов (должны отсутствовать в 50 л воды).

Материалы и оборудование:

Стерильные флаконы, стерильные чашки Петри, стерильные пробирки с мясо-пептонным агаром (10-12 мл) (состоит из экстракта мяса (500 г мяса на 1 л воды), 0,5% NaCl, 1% пептона и 1,5% агар-агара), спиртовки, стерильные пипетки.

Задание:

1. Определить общее микробное число в водопроводной воде, воде реки Люльченка, воде из скважины и др.

2. Самостоятельно изучить методики определения других санитарно-микробиологических показателей качества воды.

Ход работы:

Отбор проб воды: в зависимости от задачи исследования определяют место и время отбора пробы. Для исследования воды открытых водоемов, а также колодцев отбирают пробы воды на глубине 10-15 см от поверхности в стерильные флаконы.

Для отбора проб водопроводной воды используют стерильные склянки вместимостью 500 мл с ватно-марлевыми пробками. Отбор проб из крана производят после предварительной его стерилизации обжиганием и последующего спуска воды не менее 10 мин при полностью открытом кране. При отборе пробы напор воды может быть уменьшен. Пробу отбирают непосредственно из крана без каких-либо насадок.

Бактериологическое исследование отобранных проб должно производиться не позднее 2 ч с момента отбора или не позднее 6 ч при хранении пробы при 1-5^оС.

Из каждой пробы делают посев не менее двух различных объемов: при исследовании водопроводной воды в каждую из двух чашек вносят по 1-0,1 мл чистых вод и по 0, 01 и 0,001 мл более загрязненных. При определении микробного числа сильно загрязненных вод и сточных жидкостей исследуют по 0,0001 и 0,00001 мл.

Для посева 0,1 мл и меньших объемов исследуемую воду разводят стерильной дистиллированной водой. Готовят последовательно 10-кратные разведения.

По 1 мл каждого разведения вносят в чашки Петри и заливают тонким слоем предварительно растопленного и остуженного до 45^оС питательного агара (10-12 мл). После интенсивного перемешивания среде дают застыть на строго горизонтальной поверхности. Посевы выращивают в течение суток при 37^оС. С лупой при увеличении в два раза подсчитывают все выросшие колонии. Учитывают результаты только на тех чашках, где число колоний колеблется в пределах от 30 до 300, и производят перерасчет содержания бактерий в 1 мл исследуемой воды.

Количество колоний на обеих чашках суммируют и делят на два. Результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы воды.

Если на одной из 2 чашек подсчет невозможен, результат выдают на основании учета колоний на одной чашке. Если на двух чашках имеет место рост расплывчатых колоний, не распространяющийся на всю поверхность чашки, или выросло более 300 колоний и анализ нельзя повторить, подсчитывают сектор чашки с последующим пересчетом на всю поверхность. В этих случаях в протоколе отмечают «число КОЕ/мл - ориентировочно».

Если подсчет колоний на чашках невозможен, то в протоколе отмечают «сплошной рост».

Отчет по лабораторной работе должен содержать:

1. Название и цели работы.

2. Краткое описание хода работы.

3. Результаты определения микробного числа в пробах воды из различных источников.

Лабораторная работа № 6.