58. Иммуноферментный метод или анализ
ИФА — наиболее распространенный современный метод, ис- пользуемый для диагностики вирусных, бактериальных, прото- зойных инфекций, в частности для диагностики ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов и др.
Модификаций ИФА очень много. Широко используется твердофазный неконкурентный вариант ИФА. Его проводят в 96-луночных полистироловьгх планшетах (твердая фаза). При
проведении реакции необходимо на каждом этапе отмывать непро- реагировавшие компоненты. При определении антител в лунки, на которых сорбированы антигены, вносят исследуемую сыворотку крови, затем антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом. Проявляют реакцию, добавляя субстрат для фермента. В присут- ствии фермента субстрат изменяется, причем фермснтсубстратный комплекс подбирают таким образом, чтобы образующийся в ре- акции продукт был цветным. Таким образом, при положительной реакции наблюдается изменение цвета раствора. Для определения антигенов твердофазный носитель сенсибилизируется антителами, затем последовательно вносятся исследуемый материал (антигены) и сыворотка к антигенам, меченная ферментом. Для проявления реакции вносят субстрат для фермента. Изменение цвета раствора происходит при положительной реакции.
Иммуноблоттинг
Этот метод основан на сочетании электрофореза и ИФА. При проведении иммуноблоттинга (блоттинг от англ. blot — пятно) сложную смесь антигенов вначале подвергают электрофорезу в полиакриламидном геле. Полученные фракционированные анти- генные пептиды переносят на нитроцеллюлозную мембрану. Затем блоты обрабатывают антителами к специфическому антигену, ме- ченными ферментом, т.е. проводят ИФА блота. Иммуноблоттинг используют в диагностике инфекций, например ВИЧ
- 1. Иммунитет. Определение, виды и их сравнительная характеристика.
- 2. История развития иммунологии. Основные направления современной иммунологии.
- 3. Иммунная система организма. Структура и основные функции.
- 4. Центральные и периферические органы иммунной системы. Строение и функции.
- 5. Гуморальные факторы врожденного иммунитета (белки системы комплемента, белки острой фазы, белки теплового шока, цитокины, антимикробные пептиды и др.)
- 6. Цитокиновая сеть. Классификация и функция цитокинов.
- 7. Эндоцитозные, сигнальные и растворимые рецепторы врожденного иммунитета.
- 8. Секреторные рецепторы врожденного иммунитета.
- 9. Система комплемента
- 10. Роль белков теплового шока и острой фазы.
- 11. Характеристика антимикробных пептидов и их продуцентов.
- 12. Интерфероны, природа. Способы получения и применения.
- 13. Роль и. И. Мечникова в формировании учения об иммунитете. Неспецифические факторы защиты организма.
- 14. Клеточные факторы врожденного иммунитета (макрофаги, нейтрофилы, естесственные киллеры, дендритные клетки, тучные клетки, базофилы, nk и др.).
- 15. Фагоцитоз (стадии фагоцитоза, кислородный взрыв и др.)
- 16. Функции естественных киллеров.
- 17. Мембранные и цитозольные рецепторы врожденного иммунитета (tlr, nlr, rig). См. Ответ 7.
- 18. Классификация и характеристика дендритных клеток.
- 21. Антигены микробов и клеток человека (cd, mhc). Гаптены
- 22. Характеристика Th1, Th2, Th17 и Treg-лимфоцитов.
- 23. Иммунокомпетентные клетки; t- и в-лимфоциты, антигенпрезентирующие клетки.
- 25. Презентация антигена. Кооперация, основные принципы дифференцировки т- и в-лимфоцитов.
- 26. Формы иммуного ответа. Регуляция иммунного ответа.
- 27)Теории иммунитета. Генетика формирования т и в-клеточных рецепторов.
- 28) Иммунологическая толерантность,механизмы
- 29)Клеточный иммунный ответ (цитотоксический и воспалительный иммунный ответ, роль цитокинов, т-хелперов и макрофагов)
- 30)Гуморальный иммунный ответ (роль цитокинов, Th-2лимфоцитов и в-лимфоцитов).
- 31) Антитела. Классы, структура и функции иммуноглобулинов.
- 32) Антигенные свойства иммуноглобулинов, изотипы, аллотипы, идиотипы. Полные и неполные антитела.
- 33) Моноклональные антитела.Получение( гибридомная технология) и применение.
- 34) Генетика антителообразования.
- 35) Иммунологическая память. Первичный и вторичный ответ.
- 36) Мех-мы противоинфекционного (противобактериального и противовирусного) иммунитета
- 37) Мех-мы противогельминтного, противоопухолевого и трансплантационного иммунитета.
- 38)Гиперчувствительность немедленного типа. Мех-мы возникновения,клиническая значимость.
- 39) Анафилактический шок и сывороточная болезнь. Причины возникновения.Механизм.Их предупреждение.Аллергоспецифическая иммунотерапия.
- 40. Механизм гиперчувствительности замедленного типа. Клинико-диагностическое значение
- 44. Оценка иммунного статуса: основные показатели и методы их определения.
- 45. Механизмы развития аутоиммуных реакций.
- 46. Практическое использование серологических реакций.
- 47. Иммунологические реакции в диагностике инфекционных и неинфекционных заболеваний.
- 50. Реакция пассивной гемагглютинации. Компоненты. Применение.
- 51. Реакция коагглютинации. Механизм, компоненты. Применение.
- 53. Реакция преципитации
- 54. Реакции с использованием меченых антител или антигенов
- 55. Реакция связывания комплемента
- 56. Реакция нейтрализации
- 57. Реакция иммунофлюоресценции (риф,методКунса)
- 58. Иммуноферментный метод или анализ
- 59. Иммунная электронная микроскопия
- 60. Проточная цитометрия
- 61. Серологические реакции, используемые для диагностики вирусных инфекций.
- 62. Диагностикумы. Получение, применение.
- 63. Моноклональные антитела. Получение, применение.
- 64 Методы приготовления и применения агглютинирующих, адсорбированных сывороток.
- 65 Вакцины
- 4.2.5.1. Иммунные сыворотки и иммуноглобулины