3.2.1. Определение группы крови с помощью стандартных гемагглютинирующих сывороток

На основании реакции агглютинации эритроцитов установлено, что кровь каждого человека принадлежит к одной из четырех групп. Кровь различных групп отличается наличием агглютининов и агглютиногенов. Агглютинины (склеивающие вещества) находятся в плазме. Агглютиногены – вещества, способные склеиваться, содержатся в эритроцитах.

Имеются два вида агглютиногенов – А и В и соответственно два вида агглютининов –  и . Реакция агглютинации, т. е. склеивание эритроцитов, наступает лишь при смешении одноименных агглютининов и агглютиногенов, например  и А или  и В. Агглютинацию нельзя смешивать с процессом свертывания крови – выпадением фибрина в виде нерастворимых нитей.

Определение группы крови имеет практическое значение для переливания крови. При этом учитывают, прежде всего, свойства эритроцитов донора, так как плазма вводится в малом количестве и, разводясь в крови реципиента, теряет свои агглютинирующие качества. Однако при переливании значительного количества крови, учитывают и агглютинины донора.

Для работы необходимы: донорская кровь, стандартные сыворотки I, II и III групп двух разных серий, предметные стекла (чашка Петри), пипетки, стеклянные палочки.

Проведение работы. Группы крови определяют по свойствам эритроцитов, которые устанавливают с помощью стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины.

1. На чистые чашки Петри в обозначенные участки наносят по 1 капле сыворотки I, II и III групп двух серий, содержащих соответственно агглютинины: I –  и , II –  и III – .

2. В каждую каплю сыворотки с помощью стеклянных палочек или разных углов предметных стекол вносят небольшое количество донорской крови и тщательно размешивают кровь в капле сыворотки палочкой до тех пор, пока смесь не примет равномерного розового цвета.

3. Покачивают чашку Петри в течение 5 минут. При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков.

4. По мере наступления агглютинации, но не раньше, чем через 3 минуты в каждую смесь добавляют по одной капле физиологического раствора для предупреждения образования «монетных столбиков» из эритроцитов.

5. Определяют наличие агглютинации в каждой капле и устанавливают группу крови.

• Отсутствие агглютинации во всех трех каплях говорит об отсутствии агглютиногенов А и В в эритроцитах исследуемой крови, такая кровь принадлежит O(I) группе.

• Если агглютинация произошла с сыворотками I и III групп, содержащих соответственно агглютинины  и , то, следовательно, эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит А(II) группе.

• Если агглютинация произошла с сыворотками I и II групп, содержащих агглютинины  и , то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и эта кровь принадлежит В(III) группе.

• Наличие агглютинации в сыворотках всех трех групп указывает на присутствие в эритроцитах исследуемой крови агглютиногенов А и В, следовательно, она принадлежит АВ(IV) группе. Однако, в этом случае для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов необходимо провести дополнительное исследование со стандартной сывороткой группы АВ (IV). Отсутствие агглютинации в этой капле позволит считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к АВ(IV).

Источниками ошибок могут быть:

1. Оценка реакции отрицательной при фактическом наличие агглютинации. Это может быть обусловлено:

   1. Поздней или слабовыраженной агглютинацией в связи с малой активностью стандартных сывороток;

   2. Нарушением соотношения 1:10 при взятии большого количества крови;

   3. Наличием температуры воздуха большей, чем 25^оС. В таких случаях исследования проводят при охлаждении стекла.

2. Оценка реакции положительной при практическом отсутствии агглютинации. Это может быть обусловлено:

   1. Образованием «монетных столбиков»;

   2. Наличием панагглютинации, которая развивается при

t=15 ^оС; для ее исключения следует повторить определение при более высокой температуре;

3. Подсыханием сывороток и образованием по краям капель «зернистости», принимаемой за агглютинацию. Это может быть в тех случаях, когда чтение результатов производится более чем через 5 минут.

Оформление протокола. Записать принцип метода определения группы крови, ход работы. Зарисовать полученные результаты: обозначить номер группы крови, агглютинины стандартных сывороток и отсутствие или наличие агглютинации, например, -

группа крови

агглютинины сывороток

Вывод. Назвать и правильно записать группу крови. Обосновать полученный результат. Указать в каких случаях исследуемая кровь может быть использована в качестве донорской. Нарисовать схему совместимости групп крови системы АВО.