2.1.3. Подсчет лейкоцитов в счетной камере

с использованием меланжеров для разведения крови

Для работы необходимы: донорская кровь, смеситель (меланжер) для лейкоцитов, камера с сеткой Горяева, 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим, микроскоп, вата.

Проведение работы. Взятие и разведение крови осуществляется с помощью смесителя для лейкоцитов (рис.1.). Смеситель имеет меньший объем ампулы по сравнению со смесителем для эритроцитов и содержит белую бусинку. Набирают кровь до метки «0,5», а затем - уксусную кислоту до метки «11», чем достигают разведения в 20 раз. Для разрушения оболочки эритроцитов и подкрашивания ядер лейкоцитов после перемешивания содержимого ждут 5 минут.

Заполнение камеры проводят также, как описано в работе 3.1.1. Подсчет лейкоцитов осуществляется в 25 больших квадратах, что соответствует 25  16 = 400 малым. Количество лейкоцитов в 1мкл крови вычисляют по фопрмуле:

Х = (А  4000  200) / 80,

где А - найденное количество лейкоцитов в 400 больших квадратах;

20 - степень разведения крови;

1/4000 мм³ - объем разведенной крови над малым квадратом.

Для определения числа лейкоцитов в 1 л крови, полученный результат умножают на 10⁶.

Ошибка метода составляет в среднем 7%.

Источники ошибок при подсчете лейкоцитов те же, что и при подсчете эритроцитов. Кроме того, в число лейкоцитов могут войти и эритробласты, если они имеются в крови. Их наличие у испытуемого выясняют при изучении морфологии клеток в фиксированных и окрашенных препаратах.

Оформление протокола. Коротко описать метод, указать чем разводят кровь для подсчета лейкоцитов; записать формулу расчета количества лейкоцитов - провести ее анализ. Выписать нормальные значения количества лейкоцитов у мужчин, женщин (новорожденных).