3.2.1. Определение группы крови системы аво

с помощью цоликлонов

Цоликлон – реагент, действующим началом которого являются моноклональные человеческие антитела. Моноклональные человеческие антитела продуцируются гетерогибридомой, полученной в результате слияния человеческой лимфобластоидной линии с миеломной клеточной линией мыши. Цоликлоны изготовляются из асцитической жидкости таких мышей.

Для определения групп крови системы АВО используются цоликлоны анти-А, анти-В и цоликлон анти-АВ, содержащий смесь анти-А и анти-В антител.

Анти-А и анти-В антитела цоликлона при смешивании с нативной кровью вызывают прямую агглютинацию эритроцитов, содержащих соответствующие А и В антигены. Заключение о присутствии антигена в исследуемых эритроцитах делают по наличию положительной реакции агглютинации.

Для работы необходимы: донорская кровь, цоликлоны (анти-А, анти-В, анти-АВ), предметные стекла (чашка Петри), пипетки, стеклянные палочки.

Проведение работы. Принцип определения групп крови человека системы АВО с помощью цоликлонов такой же, как и со стандартными гемагглютинирующими сыворотками.

1. Наносят на чашку Петри индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.

2. Рядом с каплями антител помещают по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл).

3. Смешивают кровь с реагентом.

4. Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании чашки Петри в течение 3 минут.

5. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов.

• Отсутствие агглютинации во всех трех каплях говорит об отсутствии агглютиногенов А и В в эритроцитах исследуемой крови, такая кровь принадлежит O(I) группе.

• Если агглютинация произошла с цоликлонами анти-А и анти- АВ (I, II капли реагента), то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит А(II) группе.

• Если агглютинация произошла с цоликлонами анти-В и анти-АВ, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и эта кровь принадлежит В(III) группе.

Наличие агглютинации с цоликлонами анти-А, анти-В и анти-АВ свидетельствует о присутствии в эритроцитах исследуемой крови агглютиногенов А и В, следовательно, она принадлежит АВ(IV) группе.

Оформление протокола. Записать принцип метода определения группы крови, ход работы. Зарисовать полученные результаты, обозначив содержание анти-А, анти-В и анти-АВ антител в чашках Петри и отсутствие или наличие агглютинации, например:

Вывод. Назвать и правильно записать группу крови. Обосновать полученный результат. Указать в каких случаях исследуемая кровь может быть использована в качестве донорской. Нарисовать схему совместимости групп крови системы АВО, и схему оценки результатов определения группы крови по цоликлонам.