2.1 Общая характеристика метода ТСХ

В методе тонкослойной хроматографии хроматографирование веществ происходит в тонком слое сорбента, нанесенного на твердую плоскую подложку. Разделение в этом методе в основном происходит на основе сорбции-десорбции. Использование различных сорбентов, позволило значительно расширить и улучшить этот метод. Для анализа препаратов из группы блокаторов кальциевых каналов преимущественно используется восходящая тонкослойная хроматография. Этот вид хроматографии основан на том, что фронт хроматографической системы поднимается по пластинке под действием капиллярных сил, т.е. фронт хроматографической системы движется снизу-вверх. Для этого метода используется наиболее простое оборудование, так как в качестве хроматографической камеры можно использовать любую емкость с плоским дном и плотно закрывающейся крышкой, в которую свободно помещается хроматографическая пластинка [5,12].

Хроматография в тонком слое является простым и быстрым методом разделения, использующим недорогое, портативное оборудование и поэтому особенно привлекательным для большинства специальных экспертных лабораторий. В тонкослойной хроматографии используют стеклянные, металлические или пластмассовые пластинки (подложки), покрытые тонким слоем неподвижной фазы, обычно толщиной 100--300 мкм. Поскольку частицы адсорбента имеют очень маленькие размеры, а скорости потока низки, то полученные на подложке пятна (следы локализации анализируемого продукта), содержащие индивидуальный компонент, четко очерчены; это особенно важно при проведении прямого количественного анализа вещества. Образцы, как правило, 2--10 мкл наносят с помощью микрошприца или микрокапилляра в виде 0,1--1%-ных растворов в неполярном летучем растворителе (гексан, диэтиловый эфир, спирт этиловый, а также смесь других подобранных растворителей) на слой адсорбента вблизи основания пластинки, примерно, на 10--15 мм от нижнего среза. Пластинку помещают в закрытую стеклянную камеру соответствующего объема, содержащую некоторое количество определенным образом подготовленной жидкой подвижной фазы, которая перемещается вверх по слою сорбента под действием капиллярных сил. При этом компоненты образца перемещаются через слой с различными скоростями, зависящими от адсорбционных коэффициентов компонентов смеси. Проявление заканчивается удалением пластинки из камеры с последующим испарением на воздухе подвижной фазы из сорбента. Положение разделенных веществ, если они не окрашены, обычно определяют, рассматривая хроматограмму в ультрафиолетовом свете (возбуждение люминесценции) или опрыскивая ее специфическими окрашивающими реагентами, образующими при взаимодействии с бесцветным веществом окрашенное соединение. Положение пятна разделенного вещества описывается посредством измерения значения Rf. Совпадение значений Rf может служить лишь качественной характеристикой исследуемых веществ. Количественный анализ в методе тонкослойной хроматографии выполняется посредством совместного хроматографирования стандартных растворов исследуемых компонентов с изучаемым образцом. Количество изучаемого компонента в пятне напрямую связывается с площадью и интенсивностью выявленного пятна; стандарты и образцы можно сравнивать визуально или измерять с помощью, например, методов спектрофотометрии, денситометрии и т. д. [10].