5.8.4. Производные фенотиазина

едварительная проба.

К 2 мл мочи прибавляют 1 мл реактива FРN. При наличии в исследуемой пробе производных фенотиазина мгновенно развивается окрашивание от розового до синего в зависимости от структуры и количества соединения в исследуемой пробе. Проба с реактивом FРN неспецифична и имеет только отрицательное значение. При отрицательном результате пробы дальнейшее исследование мочи на наличие производных фенотиазина не проводится.

Изолирование. 5-10 мл мочи или 2 мл крови подщелачивают 50 %-ным раствором едкого натра до рН 13 и смесь кипятят в течение 10 минут на водяной бане. Полученный гидролизат охлаждают до комнатной температуры и дважды (по 20 мл) экстрагируют н-гептаном, содержащим 3 %-ный изоамиловый спирт. Гептановые извлечения из мочи объединяют, промывают водой, насыщенной гептаном, и делят на две равные части. В одной части проводится обнаружение производных фенотиазина методом тонкослойной хроматографии, а в другой – количественное определение. Экстракт из крови полностью расходуется на количественное определение, так как содержит меньшее количество соэкстрагируемых веществ.

Хроматографическая очистка и обнаружение. Из аликвоты органического экстракта удаляют в токе теплого воздуха органический растворитель. Сухой остаток растворяют в 0,2-0,5 мл хлороформа и полученный раствор поровну наносят на две пластинки “Cилуфол”. В качестве метчиков наносят аминазин (обязательно) и те производные фенотиазина, которые были обнаружены в процессе предварительного исследования (ТСХ -скрининг). Хроматографирование проводят в системе 1 и 2. Длина пробега – 10 см.

Система –1: бензол – диоксан – 25 %-ный раствор аммиака (60 : 35 : 5).

Система –2: этилацетат –- ацетон – 25 %-ный раствор аммиака в этаноле (1:1) (50 : 45 : 4).

Реагенты, используемые для проявления пластинки:

Одну пластинку опрыскивают раствором концентрированной серной кислоты в этаноле (1:9) и при положительном результате на второй пластинке обнаружение проводят с помощью реактива Марки.

Таблица 13.Величины и окраски пятен некоторых производных фенотиазина