5.8.1. Производные барбитуровой кислоты

Изолирование. 10 мл мочи в делительной воронке подкисляют 2 М раствором кислоты соляной до рН 2, трижды экстрагируют хлороформом по 10 мл. Хлороформные фазы отделяют и объединяют, фильтруя через безводный натрия сульфат. Органический растворитель удаляют в токе теплого воздуха.

Хроматографическая очистка и обнаружение. Остаток растворяют в небольшом объеме (0,1-0,2 мл) хлороформа и количественно с помощью капилляра переносят на стартовую линию хроматографической пластинки “Cилуфол”. На расстоянии 2 см от анализируемой пробы в одну точку (диаметр не более 0,5 мл) последовательно вносят по 0,02 мл спиртовых растворов (1 мг/мл) барбитала, фенобарбитала и этаминала-натрия.

Пятна подсушивают, хроматографирование проводят в системе хлороформ – н - бутанол – 25%-ный раствор аммиака (70 : 40 : 5). Камера предварительно насыщается системой растворителей в течение 20 минут. Длина пробега растворителей 10 см. После подсушивания при комнатной температуре или в токе теплого воздуха до полного удаления растворителей, пластинки опрыскивают соответствующими реагентами.

Реагенты, используемые для проявления пластинки:

1. Раствор сульфата ртути(II), НgSO4, 5%-ный раствор.

2. Раствор дифенилкарбазона (ДФК), 0,02%-ный раствор (следует избегать избытка дифенилкарбазона).

Барбитураты обнаруживают в виде сине-фиолетовых или красных пятен на исчезающем сиреневом фоне.

Предел обнаружения: 1 мкг анализируемого соединения.

Значения Rf:

Барбитал 0,70-0,75.

Фенобарбитал 0,49-0,55.

Этаминал-натрия 0,94-0,96.

Барбамил 0,85-0,92.

Бутобарбитал 0,78-0,85.

Величины Rf по отношению к метчикам дают возможность сделать предположение о присутствии барбитуратов в исследуемой пробе.

При положительном результате хроматографического исследования проводится дополнительное обнаружение с помощью цветных тестов или микрокристаллоскопических реакций. Данные реакции проводятся с остатками после удаления органического экстрагента и проведения изолирования из новой аликвоты мочи (10 мл) по методике, описанной выше.

Цветной тест: на фильтровальную бумагу в одну точку наносят 2-3 капли раствора барбитурата в органическом растворителе или кислого извлечения из мочи, подсушивают, затем наслаивают 1-3 капли 1 %-ного спиртового раствора нитрата кобальта Со(NO3)2, подсушивают и вносят бумагу в пары 25 %-ного раствора аммиака – пятно приобретает красно-фиолетовое окрашивание.

Микрокристаллоскопическая реакция: к сухому остатку на предметном стекле добавляют одну каплю 10 %-ного раствора аммиака, а после растворения остатка одну каплю 10 %-ного раствора серной кислоты. Через 10-15 минут наблюдают характерные сростки кристаллов.