2.2 Среды для культивирования микроорганизмов

Для культивирования микроорганизмом использовали готовые питательные среды: мясопептонный бульон (г. Санкт-Петербург), МПА (г. Санкт-Петербург), бульон Хоттингера (г. Оболенск). Для идентификации БГКП ? среда Кесслера (г. Оболенск), среда Эндо (г. Оболенск), Левина (г. Оболенск), среды Гисса с адонитом (г. Оболенск), инозитом (г. Углич), сорбитом (г. Оболенск), рамнозой (г. Углич), среда Кларка (г. Оболенск). Висмут-сульфитный агар (г. Оболенск), агар Плоскирева (г. Оболенск) используется для дифференциации шигелл и сальмонелл. Ацетамидный агар (с. Петрово-Дальнее) был дифференциальной средой для синегнойной палочки.

Кровяной агар готовили из обычного мясопептонного агара. Агар расплавляли, охлаждали до 42?45°С, добавляют 5% кроличьей крови. Среда разливалась в чашки слоем в 5 мм.

Сахарный бульон (бульон с глюкозой). К 1л мясопептонного бульона нейтральной реакции прибавляли глюкозу в количестве 0,25мг?2г. Нужный углевод перед прибавлением растворял в небольшом количестве воды. Стерилизовали сахарный бульон в аппарате Коха 3 дня подряд по 1 часу.

Среда Хью-Лейфсона (для дифференциации стафилококков и микрококков по их способности к ферментации глюкозы в анаэробных условиях). К 1 л дистиллированной воды добавили 2 г пептона, 5 г NaCl, 3 г агар-агара, подогревали до растворения ингредиентов, подщелачивали 20% NaOH до pH 7,4?7,5, доводили объем до первоначального, добавляли 3 мл 1% водного раствора бромимолового синего, стерилизовали при 0,5 атм. 20 мин.

Олькеницкого среда (трехсахарная среда с мочевиной) для дифференциации энтеробактерий - состав: 1 г лактозы, 1 г сахарозы, 0,1 г глюкозы, 1 г мочевины, 0,02 г соли Мора, 0,03 г гипосульфита. Растворяли в небольшом количестве воды на водяной бане и добавляли к 100 мл расплавленного и охлажденного до 50°С МПА, размешивали, фильтровали через марлю, устанавливали рН 7,2?7,4 и доливали 0,4 мл 0,5% р-ра фенолового красного. Применяют для накопления и дифференциации энтеробактерий.

Среда Симмонса ? питательная среда, применяемая для определения способности бактерий использовать в качестве единственного источника углерода цитраты. Готовили добавлением к среде Козера 0,02% магния сульфата, 0,3% нейтрального цитрата натрия, 2% агара. После растворения агара устанавливали рН 7,2 и прибавляют 10 мл на 1 л 15% спиртового р-ра бромтимолового синего. Среду фильтровали, разливают по пробиркам, стерилизовали 15 мин при 120°С, скашивали.

Среда КингА (идентификация псевдомонад). Растворили 45 г среды в 1 литре дистиллированной воды. Добавили 10 мл глицерина. Хорошо перемешали и растворили нагреванием при частом перемешивании. Кипятили в течение 1 минуты до полного растворения. Разливали в соответствующие емкости и стерилизовали в автоклаве при 121°С в течение 15 минут.

Желточно-солевой агар ? элективная среда для стафилококков. Для изготовления ЖСА к стерильному, расплавленному и охлажденному до 48°С МПА (рН 7,2?7,4) с 7,5?10% натрия хлорида добавляли 15?20% по объему стерильной желточной эмульсии . Среду быстро перемешивали и разливали в чашки Петри.

Среда Сабуро - применяется для культивирования дрожжей и плесени. В воду добавляли пептон и кипятили 10 минут. Фильтровали через полотно. К полученному объему после фильтрации прибавляли глюкозу или мальтозу. Если рН выше, чем 5,7, то подкисляли 5% раствором HCl до рН 5,7. Разливали в стерильные пробирки по 10 мл. Стерилизовали при 110°С (0,5 кгс/кв. см ? 30 минут).