13.2. Методы обнаружения и количественного определения монооксида углерода.

Обнаружение СО в крови проводят непосредственно, без предварительного изолирования. Используют спектроскопические, спектрофотометрические, газохроматографические, химические и другие методы.

Спектрофотометрический метод обнаружения монооксида углерода в крови.

В крови лиц, отравленных СО, имеются как окси, так и карбоксигемоглобин. Кровь разбавляют до тех пор, пока раствор приобретет светло-розовую окраску.

Спектр оксигемоглобина имеет две полосы поглощения: 577-589 и 536-556 нм; карбоксигемоглобина - при 564-579 и 523-546 нм. При добавлении (NH₄)₂S или Na₂S₂O₄ (дитионит) оксигемоглобин превращается в дезоксигемоглобин, который имеет одну полосу - 546-596 нм. Карбоксигемоглобин не восстанавливается при добавлении сульфида аммония или дитионита и полосы поглощения карбоксигемоглобина не исчезают. Для обнаружения COHb в крови спектофотометрическим методом снимают спектр поглощения крови, разбавленной и обработанной дитионитом. При наличии COHb в крови – в спектре поглощения наблюдаются 2 максимума, при отсутствии COHb – один максимум. Метод малочувствителен, применяется при содержании 10-30% COHb.

Химические методы обнаружения СО в крови.

Эти методы основаны на том, что кровь, содержащая COHb, не изменяет свою окраску от прибавления определенных реактивов, а не содержащая COHb - изменяет окраску.

1. Проба Гоппе-Зейлера (после прибавления 30% NaOН кровь с COHb остается красной, а не содержащая COHb - буреет).

2. Проба Бюркера (при добавлении K₃[Fe(CN)₆] кровь, не содержащая COHb, становится желтой).

3. Проба Залесского (реакция с CuSO₄: кровь, не содержащая HbCO, становится зеленой).

4. Проба Либмана (при добавлении 40% раствора формальдегида появляется коричнево-черная окраска).

Количественное спектрофотометрическое определение COHb.

Определение COHb состоит в том, что измеряют оптическую плотность разбавленной и обработанной дитионитом анализируемой крови при 538 нм (А₁) и 550 нм (А₂), затем насыщают кровь монооксидом углерода ( переводят все формы гемоглобина в COHb) и измеряют А при 538 нм (А₃). ). Расчет HbCO проводят по формуле

Насыщение крови монооксидом углерода проводят в два этапа:

Первый этап - пропускают СО в течение 15 минут. Второй этап - прибавляют дитионит и еще 5 минут пропускают СО, т.к. в крови остается метгемоглобин, который переводят в дезоксигемоглобин (прибавлением дитионита), а затем в HbCO. Метгемоглобин более прочно связан с кислородом (в метгемоглобине Fe³⁺, а в оксигемоглобине и гемоглобине - Fe²⁺).

Известны и другие методики спектрофотометрического определения COHb, отличающиеся аналитическими длинами волн и формулами расчета COHb.

Газохроматографическое определение СО.

Кровь, содержащую СО, нагревают, пары собирают и вводят в хроматограф. СО восстанавливается в присутствии катализатора (Ni) в CH₄, который регистрируют детектором (ДИП).

Наиболее надежным диагностическим признаком отравления СО являются результаты судебно-химического исследования.

Физиологическая норма содержания СOHb в крови - 1,5-3%, верхняя граница нормы - 10%.

10-20% - легкая головная боль;

20-30% - головная боль, ощущение пульса в висках;

30-40% - сильная головная боль, слабость, тошнота, рвота;

40-50% - то же, учащение дыхания и пульса;

50-60% - учащение дыхания, пульса, судороги;

60-70% - то же, ослабление дыхания и сердечной деятельности;

70-80% - слабый пульс, остановка дыхания и смерть.

Такое соответствие между концентрацией HbCО и тяжестью отравления имеется не всегда. Эти данные приблизительны. Тяжесть отравления зависит от внешних условий (давление, влажность воздуха, температура) и особенностей организма (возраст, пол).

Оказание первой помощи: вынести на свежий воздух, искусственное дыхание.