9.1. Общая схема обнаружения неизвестного яда.

Огромный круг лекарственных веществ, представляющий токсикологический интерес, и постоянное совершенствование методов их анализа привели к формированию процесса идентификации неизвестного лекарственного вещества, ставшего причиной отравления. Этот процесс состоит из 2-х этапов: предварительного, позволяющего выявить принадлежность яда к определенной группе химических соединений, и подтверждающего исследования, которое позволяет идентифицировать конкретное вещество.

Проведение предварительного отбора или «скрининга» может быть основано на использовании разнообразных химических или физико-химических методов. В качестве примера можно привести химический скрининг алкалоидов с общеалкалоидными реактивами. Более совершенным и широко используемым в настоящее время является скрининг исследуемых веществ на основе ТСХ. Он позволяет за минимальное время с достаточно высокой чувствительностью выявить из большого круга лекарственных соединений одно или несколько веществ, чтобы затем целенаправленно выбрать схему химико-токсикологического анализа.

Качественной характеристикой определяемого вещества на данном сорбенте и в данной системе растворителей является величина R_f (отношение расстояния, пройденного веществом, к расстоянию, пройденному растворителем). В соответствии с определением R_f всегда < 1. Величина R_f зависит от техники эксперимента, активности и природы сорбента, толщины слоя сорбента, температуры, качества и толщины слоя сорбента, температуры, качества и природы растворителя, детектирования и др. Отношение величины R_f определяемого вещества к величине R_f стандарта (метчика) обозначают R_st. Воспроизводимые значения R_f и R_st получаются при соблюдении всех методических указаний.

Пробы наносят мерным капилляром, микрошприцом или обычным капилляром на линию старта на расстоянии не менее 1 см от нижнего края пластинки. Диаметр пятна не должен превышать 2-3 мм. Пластины с нанесенной пробой помещают в хроматографическую камеру, при этом слой подвижной фазы должен быть ниже линии старта на 0,5 – 1 см. Расстояние между соседними пробами на стартовой линии должно быть не менее 1 см.

В методе ТСХ используют различные сорбенты (оксид алюминия, силикагель, целлюлоза и др.), нанесенные на пластину.

В качестве хроматографической камеры используют стандартные камеры или стеклянные емкости любой формы, имеющие герметические крышки. В хроматографическую камеру помещают органические растворители или их смеси (подвижная фаза) и насыщают камеру парами растворителя в течении 30 мин. В качестве метчиков (свидетелей) используют субстанции анализируемых («подозреваемых») веществ. Следует иметь в виду, что в случае использования в качестве метчиков лекарственных веществ, извлеченных из таблеток и других лекарственных форм, наблюдается не полное соответствие R_f метчика и определяемого вещества. Обнаружение (детектирование) определяемых веществ на хроматограмме проводят в УФ- свете и после обработки хроматографических пластин специальными реагентами. Пятна, обнаруженные на хроматограмме, копируют и измеряют расстояние от центра пятна до стартовой линии, рассчитывают R_f.

При анализе биологических объектов обязательно проведение холостого и контрольного хроматографического разделения, чтобы выявить влияние фона.

Система ТСХ - скрининга предусматривает поэтапное исследование токсикологически важных соединений: на первом этапе проводится скрининг в общих системах растворителей и, при положительном результате, исследование элюатов в частной системе растворителей.

Критерием выбора общих систем растворителей является разделение определяемых веществ на определенные группы, локализованные в хроматографические зоны.

В основу выбора частных систем растворителей положена высокая эффективность разделения исследуемых соединений, входящих в ту или иную хроматографическую зону.

Обнаружение веществ на хроматограмме осуществляется на основе использования (последовательного или параллельного) реагентов, избирательно реагирующих с лекарственными веществами, входящими в определенную химическую группу.

Метод имеет отрицательное судебно-химическое значение. При положительном результате проводят исследование, включающее: химические реакции, ГЖХ, фотометрию и УФ- спектрофотометрию, фармакологические пробы.

Таким образом, общую схему обнаружения неизвестного яда можно представить следующим образом.

ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

ТСХ в общих системах растворителей

(при положительном результате)

ТСХ в частных системах растворителей