3.6.2 Методика окраски

Поместите пронумерованные мазки на мостик в количестве, удобном и безопас­ном для работы (максимум 12). Убедитесь, что мазки не соприкасаются друг с дру­гом.

1. Залейте все предметное стекло раствором аурамина О и оставьте на 15 минут для прокрашивания. Убедитесь, что раствор остался на предметных стеклах. Не нагревайте и не используйте фильтровальную бумагу

1. Промойте мазки дистиллированной водой и удалите жидкость

2. Залейте обесцвечивающим раствором или 3,0% солянокислым спиртом на 3- 5 минут;

29

4. Промойте дистиллированной водой и удалите оставшуюся жидкость

5. Залейте мазки одним из приготовленных растворов: перманганата калия, ак­ ридинового оранжевого на 2 минуты, кислого фуксина и 0,25% водным ра­ створом метиленового синего на 3-5 минут и оставьте для прокрашивания

6. Промойте мазки дистиллированной водой

7. Оставьте мазки высыхать на воздухе, ни в коем случае не промокайте их филь­ тровальной бумагой и т. д.

8. Просматривайте мазки как можно скорее после приготовления.

Предосторожности во время окрашивания:

1. Не сокращайте время экспозиции с раствором солянокислого спирта или сер­ ной кислоты.

2. Избегайте приготовления слишком толстых мазков. Это может воспрепят­ ствовать качественному контакту с обесцвечивающим реактивом, а фоновый краситель может полностью затушить присутствие кислотоупорных бакте­ рий. Толстые мазки могут отслаиваться, что приведет к потере материала и возможному переносу его на другие мазки. Слишком интенсивное фоновое окрашивание может маскировать присутствие кислотоупорных палочек

3. Мазки, окрашенные люминесцентными реактивами, следует просмотреть в течение 24 часов после приготовления

4. При люминесцентной микроскопии микобактерии выглядят в виде светящих­ ся палочек. Фон мазка зависит от используемого красителя: бледно-желтый фон определяется перманганатом калия, оранжевый фон - акридиновым оран­ жевым, малиново-красный до черного фона - кислым фуксином, темный фон - метиленовым синим.