Литература

1. Белобородова, Н. Г., Чугаев Ю. П. // Проблемы туберкулеза. — 2003. — № 3.

2. Диагностика и лечение туберкулеза в свете международной стратегии DOTS: матер. VII cъезда фтизиатров РБ и науч.-практ. конф. / Ж. Е. Белян [и др.]. — Минск, 2008.

3. Пухальская, Н. С. Интегративный подход к проблемам туберкулеза и ВИЧ-инфекции: II Междунар. науч.-практ. конф. / Н. С. Пухальская. — Гомель, 2011.

УДК:612.014.1

СОДЕРЖАНИЕ ОБЩЕГО, ТРОМБОЦИТАРНОГО И СВОБОДНОГО

СЕРОТОНИНА В ПЛАЗМЕ ДОНОРОВ КРОВИ

Корж А. В., Сергиенко А. В., Андрияка А. А.

Научный руководитель: д.м.н., профессор С. В. Выдыборец

«Национальная медицинская академия последипломного образования им. П. Л. Шупика»,

«Киевский областной онкологический диспансер», г. Киев, Украина

«Черниговская областная станция переливания крови», г. Чернигов, Украина

Введение

Серотонин (СН), как и другие биогенные амины, обладает выраженной эндокринно-метаболической активностью, существенно влияет на обменные процессы. Показатели содержания биогенных аминов в биологических субстатах используют для оценки функционального состояния организма и тканей [1–3]. СН, который помимо гранулоцитов, абсорбируется и депонируется в плотных гранулах тромбоцитов, при дегрануляции последних может влиять на течение фебрильных реакций в посттрансфузионном периоде, а также усиливать у реципиентов клинику бронхоспазма при анафилактических реакциях. В доступной литературе мы не встретили работ посвященных раздельному определению общего, тромбоцитарного и свободного серотонина в плазме доноров крови.

Цель исследования

Изучить содержание СН в плазме крови и тромбоцитах доноров крови.

Материал и методы исследования

Нами обследовано 126 первичных доноров (73 мужчин и 53 женщин в возрасте 20–57 лет) крови. Определение общего, тромбоцитарного и свободного СН проводили по методике С. В. Выдыборец и соавт. (2006), а подготовку плазмы к исследованию осуществляли по методике [2]. Плазму, обогащенную тромбоцитами, получали по методике [1], используя в качестве стабилизатора 3,8 % раствор цитрата натрия. Проводили определение содержания общего СН в плазме крови богатой тромбоцитами, и свободный СН в плазме крови, бедной тромбоцитами (после осаждения тромбоцитов). Для получения свободной фракции СН навеску высушенной до постоянного веса при 60 °С плазмы крови, обедненной тромбоцитами, например, 50–100 мг, экстрагировали 0,1 н раствором хлористоводородной кислоты при 4 °С в течение суток. Полученная кислотно-экстрагируемая фракция СН является физиологически активной и обеспечивает проявление его физиологических и патологических эффектов. Мы проводили также определение содержание СН в тромбоцитах после их осаждения из плазмы и полного разрушения. К осадку тромбоцитов добавляли 1 мл бидистиллированной воды, тщательно перемешивали стеклянной палочкой, затем приливали 1 мл 10 % раствора трихлоруксусной кислоты для разрушения тромбоцитов и осаждения белков, снова перемешивали и центрифугировали при 1500 об./мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость, содержащую высвобожденный из тромбоцитов СН, вносили в химические пробирки, добавляли 0,2 мл 0,1 % раствора L-цистеина в 0,1 н соляной кислоте и 1,8 мл 0,1 % раствора ортофталевого альдегида в метаноле. В пробирки вносили по 0,1 мл 0,1 М раствора нингидрина (контроль рН 7,0), пробы выдерживали 10 мин на кипящей водяной бане, затем охлаждали в течение часа (время необходимое для образования флюорофора. Обьем всех проб доводили до 5 мл бидистиллированой водой. В качестве стандарта использовали 0,5 мкг СН совмещенного в одной пробирке с 0,5 н. раствором хлорной кислоты и проведенного через все этапы определения. Контролем реактивов являлись 2 мл раствора хлорной кислоты проведенной через все этапы определения.

Содержание СН определяли относительно стандартов на флюориметре «БИАН-130» —«БИАН-100» при длине волны возбуждения флюоресценции 365 нм и максимуме индуцированной флюоресценции 490 нм. Расчет количественного содержания СН в пробе вели по формуле:

где: А — количество СН в нмоль/г; С — концентрация стандарта; Фоп — флюоресценция опытной пробы (разность показаний опытной пробы и контроля реактивов); Р — разведение субстрата; 1000 — коэффициент пересчета мкмоль в нмоль; 1000 — коэффициент пересчета количества мг на 1 г навески; Фст — флюоресценция стандарта (разность показаний стандарта и контроля реактивов); 176 — молекулярный вес серотонина; В — вес пробы в мг; 2 — количество мл безбелкового экстракта субстрата.

Для оценки депонирующей способности тромбоцитов количество СН в 1 тромбоците рассчитывали по следующей формуле:

Тс — содержание СН в 1 тромбоците в амоль; Ст — содержание СН, связанного с тромбоцитами в нмоль/г; Т — количество тромбоцитов в 1 л плазмы.

Результаты исследований обрабатывали методами вариационной статистики.

Результаты исследования и их обсуждение

Содержание общего (3,03 ± 0,15) нмоль/г, тромбоцитарного (2,43 ± 0,11) нмоль/г и свободного СН (0,60 ± 0,05) нмоль/г в плазме доноров крови, а СН в 1 тромбоците — (1,69 ± 0,11) амоль.

Как видно из приведенных данных, соотношение свободного, физиологически активного, СН у доноров составляло примерно 1/5 часть от общего. Значительно большая часть СН оказалась связанной с тромбоцитами (приблизительно 4/5 от общего). Полученные нами данные согласуются с ранее полученными данными других авторов [3]. Нами не выявлено различий в содержании общего, тромбоцитарного и свободного СН в плазме крови у доноров в зависимости от пола и возраста. Учитывая роль СН в формировании фебрильных реакций и посттрансфузионных осложнений, на наш взгляд, актуальным может быть определение содержании общего, тромбоцитарного и свободного СН в плазме крови доноров и реципиентов перед трансфузией плазмы или концентрата тромбоцитов для прогнозирования возможности возникновения осложнений и их предупреждения.

Выводы

Определение содержания общего, тромбоцитарного и свободного СН в плазме крови у доноров и больных, а также его количества в одном тромбоците имеет важное диагностическое и прогностическое значение в клинической практике.