Использование метода Бенедикта для количественного определения белка в альбумине

Саедгалина О.Т. (5 курс, фарм. ф-т)

ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России

Кафедра химии фармацевтического факультета

Научный руководитель – к.фарм.н., доц. Симонян Е.В.

Актуальность: Альбумин – природный белок, который содержит все незаменимые аминокислоты и применяется в виде 5% и 10% растворов в инфузионной терапии для коррекции гипоальбуминемии различного генеза, восстановления коллоидно – онкотического давления, нарушенной центральной и периферической гемодинамики, а также как средство дезинтоксикационной терапии при дегидратации и «сгущении» крови. Все существующие методы анализа белковых препаратов основаны на реакциях комплексообразования с солями тяжелых металлов. Однако до настоящего времени универсальной методики не разработано. Так, биуретовый метод позволяет определить белок в диапазоне концентрации от 2-10 мг в пробе. Методом Лоури определяют в основном ароматические аминокислоты. Поэтому целью нашего исследования явилось определение белка в альбумине с помощью метода Бенедикта.

Материалы и методы: УФ – спектрофотометрия.

Результаты и обсуждения: метод Бенедикта аналогичен биуретовому, но отличается большей чувствительностью. Реактив Бенедикта готовили по методике: 17,3 г цитрата натрия и 10,0 г натрия гидрокарбоната растворяли при нагревании в 40 мл воды и прибавляли 1,73 г меди сульфата, растворенного в 10 мл воды. Объем раствора доводили водой до 100 мл. Предварительно проводили определение со стандартным раствором альбумина в различных концентрациях. Определение проводили по методике: 1, 2, 3 и 4 мл раствора альбумина 10% помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляли 0,2 мл реактива Бенедикта и 2 мл натрия гидроксида 3%, доводили водой до метки и перемешивали. Было установлено, что комплекс характеризуется максимумами светопоглощения при 335 – 355 нм в .зависимости от разведения. По полученным данным был построен калибровочный график и установлено, что линейная зависимость при 335 нм наблюдается в интервале концентраций 0,004 - 0,012 г/мл. Значение коэффициента регрессии составляет 0,990, что полностью соответствует валидационным критериям. При 355 нм значение коэффициента регрессии в интервале 0,004 – 0,016 г/мл приближается к 1, однако меньше 0,99 (R² =0,9693). Изменение области построения (0,008 – 0,016 г/мл) приводит к практически идеальной линейности, поскольку коэффициент регрессии равен 0,9979. Данная методика была применена для контроля качества альбумина в мягких лекарственных формах. В предварительных исследованиях было установлено, что метод Лоури и биуретовый метод дают высокие погрешности определения, поскольку взаимодействуют со всеми компонентами основ. При определении концентрации белка методом Бенедикта наблюдалась незначительная погрешность определения.

Выводы.

1. Изучены спектральные характеристики продукта взаимодействия альбумина с реактивом Бенедикта и определены границы подчиняемости закону светопоглощения. 2. Разработана методика количественного определения белка в суппозиториях с помощью реакции комплексообразования с реактивом Бенедикта.