Методы изучения нормальной микрофлоры

Вид материала для исследования зависит от исследуемого биотопа и предполагаемого количества микроорганизмов в нем. Материалом для исследования часто являются отпечатки кожи и слизистых, зубной налет, слизь из верхних дыхательных путей, испражнения, влагалищное содержимое. При взятии материала соблюдают правила асептики.

Методы взятия материала для изучения микрофлоры:

• получение естественных экскретов (слюна, моча, испражнения);

• метод аппликаций (отпечатков) — снятие микроорганизмов с помощью бумажных фильтров определенной площади и перенос отпечатков фильтров на поверхность агаровой среды;

• соскоб со слизистых;

• метод смывов увлажненным стерильным ватным тампоном с кожи или слизистых;

• аспирационный метод (из межзубных пространств, гингивальных карманов, из верхних и средних отделов дыхательных путей).

• взятие материал из желудка и кишечника с помощью зондов.

Методы исследования микрофлоры.

1. Бактериоскопический метод имеет самостоятельное значение для биотопов, в которых обитает большое количество различных микроорганизмов: полость рта, кишечник, вагина. Мазок окрашивают по Граму и изучают морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов.

Метод дает общее представление о численности микроорганизмов, позволяет получить общее представление о составе микрофлоры (преобладание Грам+ или Грам- бактерий определенной формы, наличие грибов), а также выявить микроорганизмы, которые не культивируются на питательных средах.

2. Бактериологический метод используется для биотопов с широким спектром микроорганизмов, выполняется с учетом данных бактериоскопии.

Основные принципы бактериологического метода при исследовании микрофлоры:

• материал лучше исследовать сразу, при невозможности немедленного исследования материал доставляют в лабораторию в пробирке с консервантом в течение 2 часов, так как при более длительном хранении значительно нарушаются взаимоотношения между видами;

• первичный посев материала проводят без предварительного обогащения, так как обогащение нарушает количественные соотношения видов;

• используют большой набор питательных сред, различные условия культивирования (аэробные, анаэробные, атмосфера СО₂);

• в клиническом образце определяют соотношение анаэробов и аэробов, качественный (видовой) и количественный (соотношение разных видов) состав микроорганизмов в микроорганизмиоценозе конкретного биотопа.

Качественное обнаружение даже единичных особей патогенных микроорганизмов свидетельствует о крайнем неблагополучии в биотопе.

Для количественного подсчета УПМ в исследуемом материале готовят ряд разведений материала (10^-2, 10^-4, 10^-6) и производят количественный посев этих разведений на сектора чашек с различными питательными средами. Для выделения энтеробактерий используют среду Левина, для выделения энтерококков — желчно-кровяной агар, для синегнойной палочки — фурагиновый агар, для грибов — среду Сабуро. Микроорганизмов идентифицируют общепринятым способом: УП бактерий обычно идентифицируют до вида, грибы — до рода.

Количество бактерий определяют по формуле:

КОЕ/мл (г) = количество колоний на определенном секторе х фактор разведения х 20,

где 20 —индекс пересчета на 1 мл при посеве 1 капли (0,05 мл) разведения материала.

• определяют наличие факторов патогенности у выделенных штаммов (гемолизинов, плазмокоагулазы, капсулы).

• через 5–7 дней целесообразно провести повторное микроорганизмиологическое исследование на дисбиоз.

Микробиологическое заключение базируется на сравнении полученных результатов с установленной нормой для данного биотопа с учетом возраста обследуемого.